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首页 > 新闻中心 > 石胆酸ELISA试剂盒检测原理石胆酸ELISA试剂盒是一种用于定量检测生物样本(如血清、血浆、尿液、组织匀浆等)中石胆酸浓度的免疫学检测工具。以下是关于该试剂盒的详细信息:
1. 检测原理
ELISA技术:通常基于抗原-抗体特异性结合的原理,采用夹心法或竞争法。
夹心法:固相抗体捕获样本中的LCA,随后通过酶标记的另一抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,通过底物显色反应定量。
竞争法:适用于小分子抗原(如LCA),未标记的LCA与酶标LCA竞争结合抗体,通过抑制显色反应强度来推算浓度。
2. 试剂盒组成
预包被抗LCA单克隆抗体的微孔板
标准品(已知浓度的LCA溶液)
酶标二抗(如辣根过氧化物酶HRP标记的抗LCA抗体)
洗涤缓冲液、显色底物(TMB等)、终止液
封板膜、说明书
3. 适用样本类型
血清、血浆(需抗凝处理)
组织匀浆液
尿液
细胞培养上清
4. 检测范围
不同的灵敏度不同,通常为 0.1–100 ng/mL 或更低,具体需参考说明书。、
5. 应用领域
科研研究:探索LCA在肠道菌群、代谢综合征、炎症性肠病(IBD)中的作用。
药物开发:监测药物对胆汁酸代谢的影响。
6. 实验步骤(简要流程)
样本处理:离心分离血清/血浆,组织匀浆液需匀浆后离心取上清。
标准曲线制备:稀释标准品至梯度浓度。
加样:向孔板中加入标准品、样本及空白对照。
孵育:室温震荡孵育(通常1-2小时),使抗体与LCA结合。
洗涤:去除未结合物质。
加酶标二抗:孵育后再次洗涤。
显色与终止:加入底物显色,用终止液终止反应。
读数:酶标仪测定450 nm波长下的OD值。
数据分析:通过标准曲线计算样本LCA浓度。
7. 注意事项
样本保存:新鲜样本建议4℃短期保存,需-20℃或-80℃冻存(避免反复冻融)。
交叉反应:确保试剂盒特异性,避免与其他胆汁酸(如DCA、CDCA)交叉反应。
质量控制:设置空白孔、阳性/阴性对照,确保实验准确性。
操作规范:严格遵循说明书,避免污染或操作误差。
8. 常见问题
高背景值:可能因洗涤不或样本基质干扰,需优化洗涤步骤。
信号弱:检查抗体活性、样本稀释度或孵育时间。
标准曲线偏差:确保标准品稀释准确,避免污染。